小鼠原代T細胞一般從脾臟組織中得到，包括脾臟研磨、細胞分離、純化T細胞等步驟。以下是常用的小鼠原代T細胞提取流程：
實驗前準備
-
材料與試劑：新鮮小鼠脾臟、PBS緩沖液、無菌手術器械（剪刀、鑷子等）、細胞過濾器、CD4/CD8磁珠分選試劑（如需純化特定亞型），或陰選的方式去除B細胞、單核細胞、NK細胞的磁珠分選試劑，RPMI-1640培養基，人白介素2，胎牛血清，抗生素（如青霉素-鏈霉素）。
-
設備：無菌操作臺、離心機、磁力分選架。
從小鼠脾臟獲取單細胞懸液
-
小鼠頸椎脫臼處死，75%乙醇浸泡5分鐘，取出小鼠置于無菌操作臺上，左腹側朝上。
-
在小鼠左腹側中部剪開小口，撕開皮膚暴露腹壁，可見紅色長條狀脾臟。
-
在脾臟下側提起腹膜，剪開后上翻，暴露脾臟，用鑷子提起脾臟，眼科剪分離下面的結締組織，取出脾臟，剝去周圍的結締組織，期間用含有2%FBS的PBS溶液保持脾臟濕潤。
-
將脾臟放于70UM過濾網中，用注射器針芯輕輕研壓脾臟，用含2%FBS的PBS沖洗過濾網，獲細胞懸液。
-
300G離心5分鐘，收集細胞沉淀，然后加入紅細胞裂解液裂解，將紅細胞充分裂解，收集白細胞。
從單細胞懸液中分離小鼠原代T細胞
-
全T細胞分離：利用陰選的方式去除B細胞、單核細胞、NK細胞等，按照分選試劑盒的說明書進行。
-
亞群分離（如需要CD4+或CD8+ T細胞）：
培養與檢測
-
將分離的T細胞重懸于含10%胎牛血清的RPMI-1640培養基中，并加入抗生素與人白介素2。
-
細胞密度一般控制在1-2×10^6 CELLS/ML，放入37°C、5% CO2培養箱中進行培養。
轉染
西湖凝聚體推出針對小鼠原代T的PT03 PROTEANFECT MAX小鼠原代T細胞轉染試劑盒。使用ProteanFect Max遞送EGFP mRNA至小鼠原代T細胞，實現高效表達。
企業介紹
華雅思創生物®專注于提供CGT、分子診斷和先進醫療的生物試劑和醫療耗材產品，服務客戶遍及細胞治療、疫苗抗體、醫療診斷、腦科學、合成生物、長壽研究和醫美保健等領域。"買試劑，找華雅”，華雅思創生物®憑借深厚的技術實力和嚴格的質量控制體系，已成為眾多科研機構和生物制藥企業的首選供應商。
